抗体ダイレクトクローニング法

抗体ダイレクトクローニング法は、大腸菌に抗体を発現させるコロニーアッセイ法を利用したバイオピーク独自のスクリーニング方法です。抗体を発現する大腸菌ライブラリーは、アガープレート上の抗原固相化メンブレン、コロニー形成用フィルターを配置したフィルターサンドイッチ上に播種し、培養します。この培養により、コロニー形成・抗体発現・抗原抗体反応を同時に行います。その後、メンブレンに固相化した抗原に結合した抗体を検出し、目的抗体を生産するクローンの同定します。

この方法により、短時間に多くのクローン（約3000/plate）を同時に評価し、多数の陽性クローンを同定することが出来るため、高親和性のモノクローナル組換え抗体が取得可能になりました。特に大腸菌ディスプレイ法に続いて実施することで、より大規模なライブラリから目的の抗体を生産するクローンを同定することが効果的です。

・中程度のライブラリから短期間にスクリーニング可能

　フィルター上に大腸菌を播種しコロニーを形成するため、中規模なライブラリ(10^4-5)のスクリーニングに適しています。

　（例：10cmブレート上に2000～3000コロニー）

・抗原抗体反応を直接検出し陽性クローンを同定

　　大腸菌ライブラリは寒天培地・抗原固相化メンブレン・親水フィルター上に播種し培養すると、コロニー形成され、発現誘導

　された、抗体は発現すると大腸菌から分泌されます。分泌した抗体はフィルタを透過しメンブレン上の抗原に補足・検出するこ

　とで陽性クローンを決定します。この方法により、2日間で目的の抗体を生産する大腸菌クローンの同定とクローニングが可能で

　す。

・低い偽陽性率

　バイオピーク独自技術（抗体ダイレクトクローニング法）を用いて、免疫動物のリンパ組織から、抗体遺伝子を抽出し、抗体ダイレクトクローニング専用の発現ベクターに組込み、抗体遺伝子ライブラリーを作製します。抗体遺伝子ライブラリーで大腸菌を形質転換し、コロニー形成させると同時に、抗体の発現が誘導され、次いで分泌された抗体を抗原コートメンブレンに捕捉・検出することで陽性クローンを決定します。

・ハイブリドーマ法と比べて多数のクローンを同時に評価

各クローンはプレート上にコロニーを形成させるため、ハイブリドーマ法に比べて多くの陽性クローンを得ることが可能です。

・低い偽陽性率

 　　クローンの生産する抗体の抗原抗体反応を直接検出して陽性クローンを同定することから、偽陽性がほとんどありません。抗

　体提示系のみのスクリーニングと比べると、効率的に目的抗体生産クローンを多数得ることが可能です。