抗体ダイレクトクローニング法

抗体ダイレクトクローニング法は、大腸菌に抗体を発現させるコロニーアッセイ法を利用したバイオピーク独自のスクリーニング方法です。抗体を発現する大腸菌ライブラリーは、アガープレート上に抗原を固相化したメンブレン、コロニー形成用フィルターを重層したフィルターサンドイッチ上に播種し、培養します。この培養により、コロニー形成・抗体発現・抗原抗体反応を同時に行います。メンブレンに固相化した抗原に結合した抗体を検出し、目的抗体を生産するクローンを同定します。

この方法により、短時間に多くのクローン（約3000/plate）を同時に評価し、低い偽陽性で多数の陽性クローンを同定することができるため、高親和性のモノクローナル組み換え抗体が取得可能になりました。特に大腸菌ディスプレイ法に続いて実施することで、より大規模なライブラリーから目的の抗体を生産するクローンを同定することが効果的です。

・中程度のライブラリーから短期間にスクリーニング可能

   フィルター上に大腸菌を播種しコロニーを形成するため、中規模なライブラリー(10^4-5)のスクリーニングに適しています。

 （例：10cmプレート上に2000～3000コロニー）

・抗原抗体反応を直接検出し陽性クローンを同定

   大腸菌ライブラリーは寒天培地・抗原固相化メンブレン・親水フィルター上に播種し培養すると、コロニー形成され、発現誘導 

   された抗体は大腸菌から分泌されます。分泌した抗体はフィルターを透過しメンブレン上の抗原に補足・検出することで陽性クロ

   ーンを決定します。この方法により、2日間で目的の抗体を生産する大腸菌クローンの同定とクローニングが可能です。

・低い偽陽性率

   クローンの生産する抗体の抗原抗体反応を直接検出して陽性クローンを同定することから、偽陽性がほとんどありません。抗体提

   示系のみのスクリーニングと比べると、効率的に目的抗体生産クローンを多数得ることが可能です。

・ハイブリドーマ法と比べて多数のクローンを同時に評価 

   各クローンはプレート上にコロニーを形成させるため、ハイブリドーマ法に比べて多くの陽性クローンを得ることが可能です。